“Estudio de Inhibición de la Fenoloxidasa de la Papa”

Objetivos

·        Determinar la actividad enzimática de la fenoloxidasa presente  en extractos de papa.

·        Calcular la Km de la enzima de los datos de actividad enzimática, frente a diferentes concentraciones de sustrato.

·        Estudiar el tipo de inhibición que ejerce el ácido benzoico sobre la actividad de la fenoloxidasa de la papa

Resumen

Marco Teórico

Las enzimas son catalizadores muy potentes y eficaces, químicamente son proteínas.  Como catalizadores, las enzimas actúan en pequeña cantidad y se recuperan indefinidamente.  No llevan a cabo reacciones que sean energéticamente desfavorables, no modifican el sentido de los equilibrios químicos, sino que aceleran su consecución.

La característica más sobresaliente de las enzimas es su elevada especificidad.  Esta es doble y explica que no se formen subproductos: (1) Especificidad de sustrato.  El sustrato (S) es la molécula sobre la que el enzima ejerce su acción catalítica. (2) Especificidad de acción.  Cada reacción está catalizada por un enzima específico.

La acción enzimática se caracteriza por la formación de un complejo que representa el estado de transición.

    E       +     S                         ES                    E      +   P

La velocidad de reacción está dada por la ecuación:

Donde V₀ es la velocidad inicial del proceso

             V₀ =   V_máx   [S]

                       K_M +  [S]

 [S] = concentración de sustrato

 K_M  =  constante de Michaelis – Menten

 V_máx  = velocidad máxima

Los estudios de inhibición enzimática clásica reversible implican el análisis gráfico de los recíprocos de las velocidades iniciales 1/V_o y de las concentraciones de sustrato 1/ [S]

Materiales

·        Baño termométrico

·        Tubos de ensayo

·        Gradilla

·        Bureta de 50 mL

·        Goteros 

·        Pipetas de 5 y 10 mL

·        Erlenmeyers de 125 mL

·        Gaza

·        Embudo Buchner

·        Licuadora

·        Espectrofotómetro visible.

Reactivos

·        Pirogalol (1,2,3 trihidroxibenceno) 1 % (solución madre)

·        Amortiguador

·        citrato 0.1 M de pH 6

·        NaF 1% -ac.

·        Benzoico 0.02%

·        Sulfato de Amonio

·        Solución saturada 60 – 70%

El estudiante debe traer una papa congelada.