“Separación y Cuantificación de Fracciones Proteínicas del Suero”

Objetivos

·        Aplicar la técnica de precipitación salina selectiva para separar las diferentes fracciones de proteína presentes en una mezcla.

·        Determinar el porcentaje de composición de una mezcla de proteína mediante análisis colorimétrico.

Resumen

Aplicamos la técnica de precipitación salina selectiva para separar las fracciones proteínicas del suero y determinamos el porcentaje de composición dándonos como resultado en orden decreciente la concentración de albúmina, alfaglobulina, beta y gamaglobulinas.

Marco Teórico

El suero es el líquido de color ámbar que se obtiene por centrifugación y o decantación de la sangre que se ha coagulado.  En el proceso de coagulación se separan todas las proteínas de la coagulación (fibrinógeno), conjuntamente con las células plasmáticas. 

La viscosidad del suero de debe en gran parte a la albúmina, que  constituye el 55% de las proteínas totales.  Junto con los electrolitos, la albúmina participa en la regulación del volumen sanguíneo, al evitar que el agua que forma parte de la sangre difunda hacia los espacios intersticiales; también participa en el transporte de ácidos grasos.  Las globulinas comprenden el 38% de las proteínas plasmáticas y corresponden a los anticuerpos o inmunoglobulinas (Ig) que liberan las células plasmáticas.  La función anticuerpo representa un crucial mecanismo de defensa contra infecciones virales y bacterianas de los animales y el hombre.  Tres fracciones de globulinas (alfa, beta y gamma) se pueden cuantificar y caracterizar por fraccionamiento con soluciones salinas.

Materiales

·        Pipeta

·        Gotero

·        Espátula

·        Tubos de ensayo

·        Espectrofotómetro

Reactivos

·        Suero sanguíneo

·        Cloruro de Sodio 0.9%: sal de mesa. Indefenso.

·        Reactivo de Biuret: está hecho de hidróxido potásico y sulfato cúprico, junto con tartrato de sodio y potasio. Es de color azul, cambia a violeta en presencia de proteínas y vira a rosa cuando se combina con polipéptido de cadena corta. El hidróxido de Potasio no participa en la reacción, pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar.

·        Solución patrón de Albúmina

·        Sulfato de Sodio 15.75%, 19.9% y 27.2%: irritante al aparato respiratorio, garganta. Causa dermatitis.

·        Celite: peligroso en caso de inhalación. Irritante pulmonar, efecto cancerígeno. Tóxico. Exposición prolongada causa daño a órganos blancos.

Esquema Experimental

1. Determinación de las Proteínas

·        Determine la lectura en el colorímetro a 540 nm

Separación y Determinación de las fracciones de proteínas

·        Centrifugue por 5 min. a 3000 r.p.m.

Decante el sobrenadante y adicione en tubos de ensayo las siguientes cantidades:

·        Determine la lectura en el colorímetro a 540 nm.

1. Interpretación de los resultados.

La solución de sulfato de sodio al 27.2 % que se adiciona al tubo D, precipita todas las globulinas y deja en solución las albúminas.  La solución al 19.9% (tubo C) precipita a las beta y gamma globulinas y deja en solución a la albúmina y las alfa globulinas.  La solución al 15.75% (Tubo b), precipita a las gamma globulinas y deja en solución a las albúminas y a las alfa y beta globulinas.  Los resultados esperados para la cuantificación de las diferentes fracciones de proteínas en el suero, se resumen en el siguiente cuadro.